滅菌操作開始前，需完成設(shè)備預(yù)處理與耗材準(zhǔn)備工作，避免因準(zhǔn)備不足導(dǎo)致滅菌不或設(shè)備損壞。首先應(yīng)將培育箱內(nèi)所有培養(yǎng)皿、支架、托盤等可拆卸部件取出，用 75% 醫(yī)用酒精棉球逐一擦拭表面，去除可見(jiàn)污漬與殘留細(xì)胞，隨后置于生物安全柜內(nèi)紫外線照射 30 分鐘備用。對(duì)于培育箱內(nèi)部，需先關(guān)閉二氧化碳進(jìn)氣閥門與電源，待箱內(nèi)溫度降至室溫后，用無(wú)菌紗布蘸取中性洗滌劑輕輕擦拭內(nèi)壁，清除冷凝水與附著的有機(jī)物雜質(zhì)，特別注意溫度傳感器、濕度傳感器及二氧化碳探頭等精密部件，避免用力摩擦造成損壞。耗材方面需提前準(zhǔn)備足量 75% 醫(yī)用酒精、無(wú)菌蒸餾水、專用滅菌劑（如過(guò)氧乙酸溶液）、一次性手套、防護(hù)口罩及無(wú)菌抹布，確保整個(gè)操作過(guò)程符合無(wú)菌操作規(guī)范。

目前主流的二氧化碳培育箱滅菌方法主要包括高溫干熱滅菌、過(guò)氧化氫低溫等離子滅菌與化學(xué)試劑擦拭滅菌，不同方法適用于不同設(shè)備類型與滅菌需求，需根據(jù)實(shí)際情況選擇。高溫干熱滅菌適用于具備高溫滅菌功能的培育箱，操作時(shí)先將箱內(nèi)可拆卸部件重新安裝到位，關(guān)閉箱門并確認(rèn)密封良好，通過(guò)設(shè)備控制面板設(shè)置滅菌溫度為 180℃，滅菌時(shí)間為 2 - 3 小時(shí)，同時(shí)關(guān)閉濕度控制系統(tǒng)與二氧化碳供給系統(tǒng)。滅菌過(guò)程中需實(shí)時(shí)監(jiān)控設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)，避免溫度異常波動(dòng)，滅菌結(jié)束后待箱內(nèi)溫度自然降至 60℃以下，再打開箱門通風(fēng) 30 分鐘，隨后用無(wú)菌蒸餾水擦拭內(nèi)壁，調(diào)節(jié)濕度至適宜范圍（通常為 95% 左右），通入二氧化碳至設(shè)定濃度（一般為 5%），靜置 24 小時(shí)后即可投入使用。

過(guò)氧化氫低溫等離子滅菌適用于對(duì)高溫敏感的培育箱，尤其適合含電子元件較多的設(shè)備。操作前需將培育箱內(nèi)所有部件清潔并干燥，將濃度為 30% 的過(guò)氧化氫溶液注入專用滅菌裝置，關(guān)閉箱門并啟動(dòng)滅菌程序。滅菌過(guò)程分為抽真空、過(guò)氧化氫霧化、等離子體激發(fā)、通風(fēng)排氣四個(gè)階段，總時(shí)長(zhǎng)約為 2 - 3 小時(shí)。該方法通過(guò)過(guò)氧化氫分解產(chǎn)生的羥基自由基與等離子體共同作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的高效殺滅，且滅菌后無(wú)殘留，無(wú)需額外通風(fēng)處理。滅菌完成后需通過(guò)生物指示劑（如嗜熱脂肪桿菌芽孢）驗(yàn)證滅菌效果，確認(rèn)合格后即可正常使用。

化學(xué)試劑擦拭滅菌作為日常維護(hù)的補(bǔ)充方法，適用于短期使用且污染風(fēng)險(xiǎn)較低的情況。操作時(shí)需佩戴無(wú)菌手套與防護(hù)口罩，用無(wú)菌紗布蘸取 75% 醫(yī)用酒精或 0.5% 過(guò)氧乙酸溶液，對(duì)培育箱內(nèi)壁、支架、托盤等表面進(jìn)行均勻擦拭，尤其注意角落、縫隙等易滋生微生物的部位。擦拭完成后打開箱門通風(fēng) 30 分鐘，待試劑揮發(fā)后關(guān)閉箱門，調(diào)節(jié)至正常培養(yǎng)條件，靜置 12 小時(shí)后使用。需注意該方法僅能實(shí)現(xiàn)表面消毒，無(wú)法殺滅隱藏在設(shè)備內(nèi)部管道或傳感器中的微生物，因此不能替代的滅菌操作。