安捷倫液相色譜儀作為高效分離分析的核心設(shè)備，在醫(yī)藥、環(huán)境、食品等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。其運(yùn)行穩(wěn)定性直接決定檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與可靠性，而柱壓高、柱壓不穩(wěn)定、峰分叉是使用過程中最易出現(xiàn)的三類故障。本文結(jié)合安捷倫液相色譜儀的結(jié)構(gòu)特性與實(shí)際應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，深入剖析三類故障的核心成因，并提供系統(tǒng)的排查與解決方法，為實(shí)驗(yàn)室人員提供實(shí)操性指導(dǎo)。
一、柱壓高問題：成因與解決策略
正常情況下，安捷倫液相色譜儀的柱壓會(huì)保持在相對穩(wěn)定的范圍（具體數(shù)值因色譜柱型號、流動(dòng)相黏度而異，如C18柱在甲醇-水體系中通常為8-12MPa）。當(dāng)柱壓超過正常范圍30%以上時(shí)，可判定為柱壓高故障，需從系統(tǒng)堵塞、色譜柱污染、流動(dòng)相異常三方面排查。
首先，系統(tǒng)流路堵塞是柱壓高的首要誘因。進(jìn)樣閥、在線過濾器、色譜柱入口篩板是易堵塞部位。排查時(shí)可按“由前至后"原則拆分系統(tǒng)：先斷開色譜柱入口，用純甲醇或乙腈以1.0mL/min流速?zèng)_洗流路，若柱壓恢復(fù)正常，說明堵塞位于色譜柱前端；若壓力仍高，再斷開進(jìn)樣閥出口，沖洗進(jìn)樣閥至在線過濾器段，若壓力下降，需拆解在線過濾器更換濾膜（通常為0.22μm有機(jī)相濾膜）；若進(jìn)樣閥堵塞，需用專用清洗液超聲清洗閥芯。
其次，色譜柱污染或堵塞是柱壓高的核心原因。樣品中的顆粒物、強(qiáng)保留組分易沉積在柱入口或孔隙中。輕度污染可通過“反向沖洗"解決：將色譜柱反向連接，用甲醇-乙腈（1:1）混合溶劑以0.5mL/min流速?zèng)_洗2-4小時(shí)，利用反向流動(dòng)沖開前端堵塞的顆粒物；若為強(qiáng)保留污染物（如蛋白質(zhì)、色素），需根據(jù)污染物性質(zhì)選擇清洗溶劑，如堿性污染物用5%氨水-甲醇溶液沖洗，酸性污染物用1%甲酸-乙腈溶液沖洗，沖洗后需用純?nèi)軇┻^渡平衡。若沖洗后柱壓仍高，需更換柱入口篩板（需匹配色譜柱型號，如4.6mm內(nèi)徑柱對應(yīng)4.6mm篩板）。
最后，流動(dòng)相配置不當(dāng)易被忽視。未過濾的流動(dòng)相含顆粒物，會(huì)直接堵塞流路；含鹽流動(dòng)相未及時(shí)清洗易析出鹽結(jié)晶，尤其在柱溫較低時(shí)。解決方法為：所有流動(dòng)相必須經(jīng)0.22μm濾膜過濾，水相流動(dòng)相需現(xiàn)配現(xiàn)用；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用5%甲醇水溶液沖洗含鹽流動(dòng)相流經(jīng)的流路30分鐘，再用純甲醇沖洗至基線穩(wěn)定。
二、柱壓不穩(wěn)定問題：波動(dòng)溯源與校準(zhǔn)方案
柱壓波動(dòng)超過±0.5MPa時(shí)，會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移，影響定性準(zhǔn)確性。故障根源主要集中在輸液系統(tǒng)、氣泡干擾、色譜柱狀態(tài)三方面。
輸液系統(tǒng)異常是常見誘因。安捷倫泵的單向閥磨損、密封圈老化會(huì)導(dǎo)致輸液脈沖，表現(xiàn)為柱壓周期性波動(dòng)。排查時(shí)可觀察壓力曲線：若呈周期性尖峰波動(dòng)，需拆解單向閥，用異丙醇超聲清洗閥芯（避免用硬物刮擦），若磨損嚴(yán)重需更換單向閥組件；若壓力呈無規(guī)律波動(dòng)，可能是泵密封圈老化，需檢查密封圈是否滲漏，及時(shí)更換同型號密封圈。此外，比例閥故障會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相混合比例波動(dòng)，需用校準(zhǔn)工具對比例閥進(jìn)行流量校準(zhǔn)。
氣泡干擾是易被忽略的因素。流動(dòng)相脫氣、流路中進(jìn)入空氣會(huì)導(dǎo)致柱壓驟升驟降。解決時(shí)需“分步脫氣"：新配置流動(dòng)相先經(jīng)超聲脫氣20分鐘，再通過儀器在線脫氣機(jī)脫氣；若流路已進(jìn)氣泡，需關(guān)閉泵，打開排液閥，手動(dòng)推動(dòng)柱塞桿排出氣泡，再以低流速（0.2mL/min）運(yùn)行5分鐘，待壓力穩(wěn)定后逐漸升高流速。
色譜柱填充不均勻或柱床塌陷也會(huì)導(dǎo)致壓力波動(dòng)。新柱使用前未充分平衡、驟升流速易造成柱床紊亂。處理方法為：新柱用純甲醇以0.3mL/min流速平衡1小時(shí)，再逐步升高流速至設(shè)定值；若柱床塌陷，需更換色譜柱，日常使用中需避免流速驟變（每次調(diào)整不超過0.2mL/min）、柱溫驟升驟降（升溫速率≤5℃/min）。
三、峰分叉問題：分離效能異常的排查路徑
峰分叉表現(xiàn)為單一組分出現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)重疊峰，核心原因是色譜柱效能下降、樣品預(yù)處理不當(dāng)或系統(tǒng)污染。需按“樣品-色譜柱-系統(tǒng)"的順序排查。
樣品預(yù)處理不足是首要因素。樣品中的雜質(zhì)與目標(biāo)組分共洗脫、樣品溶解性差形成沉淀，都會(huì)導(dǎo)致峰分叉。解決方法為：優(yōu)化樣品前處理流程，如用固相萃取（SPE）去除雜質(zhì)，選擇與流動(dòng)相匹配的溶劑溶解樣品（避免用強(qiáng)極性溶劑溶解非極性樣品）；若為堿性樣品（如生物堿），可在流動(dòng)相中加入0.1%三乙胺抑制拖尾與分叉。
色譜柱問題是峰分叉的關(guān)鍵。柱入口篩板堵塞會(huì)導(dǎo)致樣品在柱入口擴(kuò)散不均，表現(xiàn)為峰前端分叉；色譜柱鍵合相流失或柱效下降，會(huì)導(dǎo)致組分分離能力下降。排查時(shí)先更換柱入口篩板，若分叉消失則為篩板問題；若未改善，需檢測柱效（如用萘標(biāo)樣測定C18柱理論塔板數(shù)），若柱效下降超過30%，需更換色譜柱。日常需避免將色譜柱暴露在pH（<2或>8）條件下，防止鍵合相流失。
系統(tǒng)污染或死體積過大也會(huì)導(dǎo)致峰分叉。進(jìn)樣針污染、進(jìn)樣閥殘留會(huì)引入雜質(zhì)峰，表現(xiàn)為分叉；色譜柱與檢測器連接管路過長、接頭松動(dòng)會(huì)產(chǎn)生死體積，導(dǎo)致峰展寬分叉。解決方法為：用甲醇超聲清洗進(jìn)樣針（50℃，20分鐘），進(jìn)樣閥用10%硝酸溶液沖洗（針對金屬殘留）；更換短路徑連接管（如10cm長、0.17mm內(nèi)徑的PEEK管），擰緊接頭確保無滲漏，減少死體積。
四、預(yù)防措施：延長儀器壽命的核心要點(diǎn)
故障預(yù)防優(yōu)于事后維修。日常使用中需做好三方面工作：一是樣品管理，所有樣品必須經(jīng)0.22μm濾膜過濾，復(fù)雜樣品需預(yù)處理后再進(jìn)樣；二是色譜柱維護(hù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)沖洗，長期不用時(shí)用甲醇-乙腈（1:1）封存，避免柱內(nèi)干涸；三是定期校準(zhǔn)，每季度對泵的流量準(zhǔn)確性、檢測器波長進(jìn)行校準(zhǔn)，每年更換單向閥、密封圈等易損件。
綜上，安捷倫液相色譜儀的三類常見故障均有明確的成因與解決路徑。排查時(shí)需遵循“由簡至繁、由前至后"的原則，結(jié)合壓力曲線、峰形變化等細(xì)節(jié)精準(zhǔn)定位問題。通過科學(xué)的故障處理與日常維護(hù)，可有效提升儀器運(yùn)行穩(wěn)定性，保障檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
